Спектры флуоресценции ферментов биолюминесцентной реакции бактерий в вязких средах
| Авторы: | О. С. Сутормин, И. Е. Суковатая, В. А. Кратасюк |
| Аннотация: | Исследованы спектры флуоресценции ферментов биферментной биолюминесцентной системы (НAД(Ф)H:ФMН-оксидоредуктаза и люцифераза) в условиях различной вязкости и экстремальной температуры, превышающей оптимум функционирования. Показано, что увеличение вязкости макроокружения ферментов приводит к появлению концентрационного тушения интенсивности флуоресценции. Наибольший вклад в спектр флуоресценции белков в вязких средах вносят их «внутренние» триптофановые остатки. Спектры флуоресценции для люциферазы и НАД(Ф)Н:ФМН-оксидоредуктазы показали отсутствие заметных конформационных изменений в структуре белков в вязких средах, моделируемых различными концентрациями глицерина и сахарозы, и при экстремальной температуре. |
| Ключевые слова: | биферментная система светящихся бактерий НAД(Ф)H:ФMН-оксидоредуктаза-люцифераза, биолюминесценция, флуоресценция, глицерин, сахароза, вязкость |
| УДК: | 543.94, 577.151.03 |
| Литература: |
1. Doukyu N. Organic solvent-tolerant enzymes / N. Doukyu, H. Ogino // Biochemical engineering J. – 2010. – N 48. – Р. 270–282. 2. Gupta M. N. Enzymes in organic media. Forms, functions and applications / M. N. Gupta, I. Roy // Eur. J. Biochem. – 2004. – Vol. 271. – 1–9. 3. Jarrett J. T. Thermal inactivation of reduced ferredoxin (flavodoxin):NADP-oxidoreductase from Escherichia coli / J. T. Jarrett, J. T. Wan // FEBS Lett. – 2002, N 529. – Р. 237–242. 4. Lakowicz J. R. Principles of fluorescence spectroscopy / J. R. Lakowicz. – 3rd ed. – N. Y. : Plenum Press, 2006. – 954 р. 5. Sukovataya I. E. Effect of dielectric properties of media on kinetic parameters of bioluminescent reaction / I. E. Sukovataya, N. A. Tyulkova // Вестн. МГУ. – 2000. – Т. 41. – С. 8–11. 6. Sukovataya I. E. Kinetic analysis of bacterial bioluminescence in water-organic media / I. E. Sukovataya, N. A. Tyulkova // Luminecsence. – 2001. – N 16. – P. 271–273. 7. Sukovataya I. E. Effect of solvents on the fluorescence spectra of bacterial luciferase / I. E. Sukovataya, N. A. Tyulkova // Progress in Biomedical Optics and Imag-ing-Proc. SPIE. – 2006. – Vol. 6163. –Р. 11. 8. Sutormin O. S. Thermal stability of coupled enzyme system NADH:FMN-oxidoreductase–luciferase in solvents of different viscosity / O. S. Sutormin, I. E. Sukovataya, V. A. Kratasyuk // Luminescence. – 2012. – Vol. 27, N 2. – Р. 162. 9. The use of bioluminescent biotests for study of natural and laboratory aquatic ecosystems / V. A. Kratasyuk [et al.] // Chemosphere. – 2001. – N 42. – P. 909–915. 10. Tjulkova N. A. Purification of bacterial luciferase from Photobacterium leiognathi with use FPLS-sistem / N. A. Tjulkova // Jezowska-Trzebiatowska B., ed. Biological luminescence. – 1989. – P. 369–374. 11. Tu S. C. Activity coupling and complex formation between bacterial luciferase and flavin reductases // Photochem. Photobiol. Sci. – 2007. – N 7. – P. 183–188. 12. Tyulkova N. A. Comparative Study of Temperature Effects on Bacterial Luciferases / N. A. Tyulkova, T. P. Sandalova // Biochemistry. – 1996. – N 61. – Р. 205–214. |